小片段DNA的PCR扩增程序我要扩的DNA片段138KB扩了很多次都没有扩出来,想问问大家,谁扩过这么小的片段,PCR程序是怎么设定的本人要扩增的是138bp的小DNA,怎么也扩不出来,不知道该怎么办.我的上

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/03 04:47:44
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小片段DNA的PCR扩增程序
我要扩的DNA片段138KB扩了很多次都没有扩出来,想问问大家,谁扩过这么小的片段,PCR程序是怎么设定的
本人要扩增的是138bp的小DNA,怎么也扩不出来,不知道该怎么办.我的上游引物是5-3 CGAAGCTTAGATTAATAGTTTTAGCTATTAATC TM值是58.33 下游引物是5-3 GCGTCGACCCTAGTATAGCATTTTGTGAAG TM值是64.77 有谁可以帮我设计一下程序

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你的引物设计得不是很好,2个Tm值不协调.
但是已经这样了,我建议你优化退火温度:
先设计53、55、57、59(或60)4组,之后如果有迹象,在那个出来条带的温度附近再细化一下,再次优化温度,比如,如果你在55度出来带了,再设计54、55、56试试看,也许就会很好了.
好运!

小片段DNA的PCR扩增程序我要扩的DNA片段138KB扩了很多次都没有扩出来,想问问大家,谁扩过这么小的片段,PCR程序是怎么设定的本人要扩增的是138bp的小DNA,怎么也扩不出来,不知道该怎么办.我的上 什么是lamda DNA?和质粒DNA有什么区别?pcr的聚合酶说可以扩增8kb的lamda DNA,没说质粒DNA.那我要pcr质粒的一个片段可以扩增多大的片段? 为什么PCR能将特定的DNA片段扩增? 利用PCR如何扩增出准确的DNA片段 小片段DNA(100-200bp)的PCR扩增PCR模板是100bp-200bp的片段,用SSR引物扩增的时候,出现的不是单一的目的带,目的带出现的同时还有许多非特异性扩增条带,有时候就是条带扩不出来,对于小片段模板 PCR过程中为什么要扩增DNA片段 PCR扩增DNA片段为什么第三次才会出现引物对的配对 PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理是? 请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配? PCR技术怎样保证扩增的不是整个DNA而是某个特异片段 DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子? 细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另 关于细菌PCR扩增产物的问题,PCR扩增产物有特异性条带,怎么修改PCR程序消除?以及PCR程序是不是有问题,PCR程序应该怎么改?DNA可以用来做PCR吗?3.PCR反应程序细菌16SrDNA V3区扩增:95°C 5min;93°C 30 PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 . 请问做PCR时是否有一些措施或机制可以防止或者减少扩增过程中的DNA突变率?PCR扩增出来的片段和在生物体内自己复制的DNA片段,哪个突变率更大? PCR扩增一个500bp大小的DNA片段,若用凝胶电泳检测,用多大浓度的琼脂糖凝胶 博凌科为的长片段PCR扩增试剂盒